Deţinătoarea trofeului, CFR Cluj, va juca în deplasare cu Dunărea Galaţi, campioana Unirea Urziceni va întâlni pe Sportul Studenţesc, în vreme ce Steaua va juca în deplasare cu FCM Bacău. Dinamo şi FC Timişoara vor avea adversari facili, de liga a treia, FC Zlatna, respectiv, Sănătatea Cluj.
Mai reţin atenţia partidele FC Braşov – CS Otopeni (II), Astra Ploieşti – Farul Constanţa (II) sau FC Bihor (II) – Rapid Bucureşti.
Jocurile din şaisprezecimile de finală se dispută în sistem eliminatoriu, într-o singură manşă, pe stadionul echipei care a fost stabilită ca organizatoare de tragerea la sorţi, în zilele de 22, 23 şi 24 septembrie, cu începere de la ora 16,00, cu excepţia jocurilor televizate. În caz de egalitate după 90 de minute de joc, se procedează la prelungiri şi, dacă egalitatea persistă, se trece la lovituri de departajare din punctul de pedeapsă.
Finala competiţiei va avea loc la Iaşi, la data de 5 iunie 2010. Câştigătoarea va fi recompensată cu 270.000 de euro şi va juca în play-off-ul Europa League.
Programul meciurilor:
FCM Bacău (II) – Steaua Bucureşti
Unirea Urziceni – Sportul Studenţesc (II)
Chimia Brazi (III) – FC Vaslui
FCM Dunărea Galaţi (II) – CFR Cluj
FC Timişoara – CS Sănătatea Cluj (III)
FC Zlatna (III) – Dinamo Bucureşti
Ceahlăul Piatra Neamţ – Gaz Metan CFR Craiova (II)
Gaz Metan Mediaş – CSM Râmnicu Vâlcea (II)
FC Braşov – CS Otopeni (II)
Astra Ploieşti – Farul Constanţa (II)
Gloria Bistriţa – Dunărea Giurgiu (II)
Minerul Mehedinţi (III) – Internaţional Curtea de Argeş
FC Bihor (II) – Rapid Bucureşti
Universitatea Craiova – Gloria 2 Bistriţa (III)
Oţelul Galaţi – Unirea Alba Iulia
Politehnica Iaşi – Pandurii Tg Jiu